微生物鉴定质谱仪通过测量带电粒子在电场或磁场中的运动来确定其质量与电荷比（m/z）。具体到MALDI-TOFMS，它通过激光使样品中的分子解吸和电离，然后测量这些离子飞行时间（TOF）以确定其m/z。由于不同微生物的蛋白质图谱，因此可以利用这些图谱进行微生物的鉴定和分类。
样品制备
1.纯培养物的获取：为了获得准确的结果，首先需要从临床样本中分离出纯培养物。这通常通过在选择性培养基上单菌落分离来实现。
2.样品处理：取少量纯培养物，用于质谱分析。具体步骤包括：
-直接转移法：将菌落直接转移到质谱靶板上。
-提取法：对于一些难以直接分析的菌种，可以先进行蛋白质提取。例如，革兰氏阴性菌可以用乙醇-甲酸进行简单提取。
3.基质添加：在样品上加入基质（如α-氰基-4-羟基肉桂酸），基质在激光照射下帮助样品分子解吸和电离。
质谱分析
1.仪器校准：使用已知标准品对微生物鉴定质谱仪进行校准，以确保测量的准确性。
2.数据采集：将准备好的样品靶板放入质谱仪，设定适当的激光强度和其他参数，进行数据采集。
3.数据处理：生成的原始数据通常是一个复杂的谱图。通过专门的软件将这些谱图转换为可识别的蛋白质图谱。
数据分析与解释
1.数据库匹配：利用数据库中的参考谱图对样品的质谱图进行匹配。当前市面上有许多商业化的微生物质谱数据库，如MALDIBiotyper和VITEKMS。
2.判定标准：匹配结果根据相似度得分进行判断。通常，得分越高，匹配越准确。各公司提供的质谱数据库都有自己的得分阈值，超过该阈值即可认为鉴定结果可靠。
3.结果验证：对于罕见或鉴定结果不明确的菌种，可以通过16SrRNA基因测序等方法进一步验证。
注意事项与常见问题
1.样品纯度：混合菌样品可能导致质谱图复杂化，影响鉴定准确性。因此，确保样品纯度至关重要。
2.仪器维护：定期校准和维护仪器，以保证其稳定性和准确性。
3.数据库更新：持续更新质谱数据库，以包含新的微生物谱图，提高鉴定的覆盖广度和准确度。
